– PRÁCTICA 4- TINCIÓN VITAL CALDO CULTIVO

1. FUNDAMENTO

• En esta práctica vamos a utilizar el caldo de cultivo con nuestra muestra de la cavidad bucal, de la práctica 3.
• Vamos a utilizar como Colorante el Rojo Metilo, al 1/10000.                                                 Para ello, partimos de 10 microlitros de Colorante (0,01 ml), junto a 99,99 ml de agua destilada con la cual  enrasamos el Matraz Aforado de 100 ml.
• Una vez tengamos nuestro colorante diluido en la proporción anteriormente descrita, procederemos a la mezcla de éste con la muestra (Caldo Cultivo)

2. OBJETIVO

• Observar los distintos microorganismos presentes en nuestro caldo de cultivo, mediante una Tinción Vital(rojo de metilo).
• Debido a que es una Tinción Vital, podemos ver los microorganismos vivos ,  a diferencia de la Tinción Simple con Azul de Metileno.

3. MATERIALES 

• Papel de Filtro
• Caldo Cultivo
• Mechero Bunsen
• Asa de Siembra
• Colorante Rojo Metilo
• Agua Destilada
• Matraz Aforado 100 ml
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Pipeta Pasteur
• Micropipeta / puntas 10 microlitros

4. PROCEDIMIENTO

• Preparamos el Banco de trabajo

• Preparamos nuestro Colorante de Rojo de Metilo al 1/10000

-Para ello, cogemos con una Micropipeta de 10 microlitros el colorante, y el resto de volumen hasta llegar a 100 ml del Matraz aforado, con agua destilada (enrasamos con Pipeta Pasteur)

-Ponemos Parafilm para homogeneizar la Dilución

Para realizar la dilución del Colorante, es mejor ponerlo en un vaso de precitado y homogeneizarlo, y luego pasarlo al Matraz Aforado

• Diluimos tanto el colorante para no matar a los microorganismos presentes en la muestra, ya que queremos observar a éstos vivos.

• Una vez preparado, encendemos el Mechero Bunsen para crear un ambiente estéril.
• Esterilizamos el Asa de Siembra, y procedemos a coger una parte representativa de nuestra muestra, que se encuentra en el Caldo de Cultivo

IMPORTANTE: Poner la boca del tubo en el Mechero Bunsen al abrirlo para coger la muestra, y antes de cerrarlo 

• Dejar enfriar el asa de siembre al meterla al Caldo de Cultivo, y tras ello recoger la muestra representativa del fondo del tubo.

• Una vez tengamos ésta, la depositamos en un porta y ponemos una gota del Colorante preparado en el mismo portaobjetos

• Se homogeneiza con la ayuda del asa de siembra

 

• Ponemos cubreobjetos encima
• Observación al Microscopio

 

5. LECTURA DE RESULTADOS