1.FUNDAMENTO
- La citocromooxidasa es una enzima que en presencia de oxígeno oxida la fenilendiamina y forma indofenol (compuesto color violeta)
- Consiste en poner la colonia en contacto con fenilendiamina para saber si la bacteria sintetiza esta enzima, manifestándose con un cambio de color (azul-violáceo)
- El reactivo no se encuentra en solución, sino en tiras de papel absorbente con una zona reactiva.
- Es una técnica útil para diferenciar entre Streptococcus y Staphylococcus
2.OBJETIVO
- El objetivo de esta práctica es determinar si la bacteria en estudio produce la enzima citocromooxidasa.
3.MATERIALES
- Papel de filtro
- Guantes
- Tira reactiva
- Colonia bacteriana de interés
- Mechero Bunsen
4.PROCEDIMIENTO
- Preparamos el banco de trabajo con todo el material necesario
- Cogemos una tira reactiva que contiene el reactivo fenilendiamina para saber si reacciona y se encuentra la enzima que buscamos
- Cogemos una colonia de la bacteria en estudio , y frotar la colonia sobre la zona reactiva con ayuda del Asa de platino
dav
dav
-Es importante utilizar un cultivo fresco/puro para realizar esta técnica, 18 h)
- Esperar 10-30 segundos, y efectuar la lectura:
-Zona reacción color azul-violeta ( Oxidasa +)
-Zona reacción color rosado o sin cambio de color (Oxidasa -)
-Es importante que pasado este tiempo consideremos la prueba negativa, al poder influir el oxígeno de la atmósfera en la reacción, ya que es una condición indispensable para esta técnica
5.RESULTADO
- La bacteria 5 , que es sobre la que hemos realizado el estudio, no forma ningún producto coloreado
6.INTERPRETACIÓN
- La bacteria estudiada no produce color, por lo tanto no produce la enzima citocromooxidasa.
Cuaderno de Practicas 